警惕!身体中的尼古丁!血浆中可替宁和 3-羟基可替宁UHPLC-MSMS同时测定法发表时间:2023-08-18 09:07 众所周知,吸烟和二手烟对身体伤害极大!危害包括增加肺癌的发病率、导致不孕或胎儿畸形、容易骨质疏松等。 2020年,中国疾病预防控制中心,对北京、上海、深圳等六城市的餐饮场所工作人员进行了大规模的研究调查,经检测即使是已出台全面无烟立法城市,可替宁检出率34.12%,三羟基可替宁检出率16.32%;未出台全面无烟立法城市,相应指标更高,可替宁检出率68.04%,三羟基可替宁检出率41.94%。 (数据来源:中华预防医学杂志,年,卷(期):2021,55(12)) 如此高的检出率!烟草烟雾暴露,成为一个不容忽视的重要社会问题。 尼古丁是烟草中含量最高的生物碱,在人体内半衰期较短,其70%~80%代谢产物为可替宁。当接触烟草烟雾后,在人体的不同生物样本基质中均可检测出可替宁。可替宁在人体中可进一步代谢为3-羟基可替宁,因此,可替宁和3-羟基可替宁可作为烟草烟雾暴露的生物标志物。
为了您和家人身体健康,远离吸烟和二手烟。 血浆中可 纳鸥科技助力尼古丁代谢产物在人体内的检测,本应用在检测血浆中可替宁和羟基可替宁的基础上,对样本前处理流程、液相色谱分离条件进行了优化,建立了检测血浆中可替宁和羟基可替宁的检测方法。 一、摘要: 目的 方法 结果 结论:该方法取样量少、操作简便、方法精密度高,适合大规模样品的筛查检测工作。 二、测定原理 可替宁、3-羟基可替宁通过同位素稀释高效液相色谱质谱方法测量。向血浆(清)样品中加入甲基-D3-可替宁、反式3-羟基可替宁-D3作为内标,样品碱化然后加入到液体提取盘(SLE))中。分析物被混合的异丙醇和二氯甲烷提取,浓缩,剩余物复溶后进样到C18色谱柱上,洗脱液洗脱,LC-MS测定。 可替宁的母离子为m/z 177,子离子为m/z 80,3-羟基可替宁的母离子为m/z 193,子离子为m/z 80。内标和离子对配合各自的监控化合物。以标准系列峰面积与内标峰面积之比和可替宁、3-羟基可替宁浓度,做工作曲线。 三、实验过程 1、仪器与试剂 液相色谱串联质谱 Anavo 96孔板正压固相萃取装置(PN:AN25D021) Anavo 96孔板氮吹仪(PN:AN25D020) Anavo SLE+ 400mg 96孔板(PN: AN25H007) Anavo 2m深孔96孔板收集盘(PN: AN25J017) Anavo XP杂化硅胶UHPLC C18色谱柱(PN:AN80A006) 12通道300µL移液器 漩涡振荡器 冰醋酸、醋酸铵、氢氧化钾:优级纯 异丙醇、甲醇、二氯甲烷:色谱纯 2、标准物质可替宁:100µg/mL、 3-羟基可替宁:100µg/mL, 甲基-D3-可替宁: 100µg/mL、反式3-羟基可替宁-D3: 100µg/mL 3、标准曲线的配制 4、样品前处理准确吸取 200 μl样本(高浓度样本吸取50 μl血浆+纯水150 μl),依次加入50 μL的0.2 mol/L 氢氧化钾溶液、50 μl的D3-COT 和 D3- HC 混合内标溶液到 96 孔混合盘中,使用排枪抽吸混匀。将上述混合溶液全部转移至SLE提取盘中,放置5 min。加入0.3 ml 的5%异丙醇二氯甲烷混合液,放置5 min后,使用96孔正压固相萃取装置以3.5 psi氮气压20 s(该流程重复6次)。合并洗脱液于96孔板收集盘中,放置于96孔氮吹仪上用氮气吹干,吹干后加入100 μl纯水复溶,盖上密封垫,漩涡混匀后上机检测。 5、LC-MS-MS测定 1)HPLC的条件和参数分析柱:Anavo XP C18, 1.7µm, 2.1*100mm(PN:AN80A006)流动相:0.1%氨水-乙腈梯度洗脱条件:见表1。进样量:5 μl流速:300 μl/min柱温:40 ℃表1 梯度洗脱条件(体积分数) 2)质谱条件 电喷雾离子源(ESI);正离子扫描,喷雾电压:4500 V;离子源温度:550 ℃,碰撞气压力:中性碰撞气;气帘气压力:0.24 MPa;雾化气压力(GS1)和辅助加热器压力(GS2):0.38 MPa。多反应监测(MRM)模式采集。其他质谱参数见表1。 表2 质谱条件 可替宁色谱图 3-羟基可替宁色谱图 配套关键耗材 特色产品推荐:BioSin 96孔板氮吹仪 |