50项新国标发布！GB 31614.4-2026正式采纳超滤离心管净化，Anavo超滤管助力PQQ二钠盐精准检测

1.1 吡咯并喹啉醌二钠盐标准储备液(1000 mg/L):准确称取吡咯并喹啉醌二钠盐标准品50 mg(精确至0.1 mg),加乙二胺四乙酸二钠溶液(10 g/L)2 mL,用提取液溶解,转移至50 mL 棕色容量瓶,用提取液稀释并定容,配制得质量浓度为1000 mg/L的标准储备液。0 ℃~4 ℃保存,有效期3个月。

1.2 吡咯并喹啉醌二钠盐标准中间液 (100 mg/L): 准确吸取吡咯并喹啉醌二钠盐标准储备液10.0 mL于100 mL棕色容量瓶中, 加乙二胺四乙酸二钠溶液(10 g/L)4 mL,用提取液稀释并定容,混匀,配制成质量浓度为100 mg/L的标准中间液。0 ℃~4 ℃保存,有效期2个月。

1.3 吡咯并喹啉醌二钠盐标准系列工作液:分别吸取吡咯并喹啉醌二钠盐标准中间液1.00 mL、5.00 mL和10.0 mL于100 mL棕色容量瓶中,加入乙二胺四乙酸二钠溶液(10 g/L)4 mL,用提取液稀释并定容,混匀,配制成质量浓度分别为1.00 mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L 的吡咯并喹啉醌二钠盐标准工作液。分别吸取吡咯并喹啉醌二钠盐标准溶液(1.00 mg/L)1.00 mL、5.00 mL于10 mL棕色容量瓶中,加入乙二胺四乙酸二钠溶液(10 g/L)0.4 mL,用提取液稀释并定容,混匀,配制成质量浓度分别为0.100 mg/L、0.500 mg/L的吡咯并喹啉醌二钠盐标准工作液。吸取吡咯并喹啉醌二钠盐标准溶液(0.100 mg/L)4.00 mL于10 mL棕色容量瓶中,加入乙二胺四乙酸二钠溶液(10g/L)0.4mL,用提取液稀释并定容,混匀,配制成质量浓度为0.0400 mg/L的吡咯并喹啉醌二钠盐标准工作液。吡咯并喹啉醌二钠盐标准系列工作液的质量浓度分别为0.0400 mg/L、0.100 mg/L、0.500 mg/L、1.00 mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L。临用现配。

2、试样的制备与保存

均匀性液体样品直接混匀,含气样品使用前超声除气。不均匀性液体样品、半固体样品用均质器均质后混匀。固体样品用高速粉碎机粉碎或研钵研磨成粉状后混匀。糖果等样品需经过-18 ℃冷冻处理后经高速粉碎机粉碎或剪碎混匀。试样处理后装入洁净容器中,密封并做好标记,置于0 ℃~4 ℃冷藏保存。

3、试样前处理

3.1 液体试样

称取2 g(酱油试样称取0.5 g,精确至0.001 g)试样于50 mL离心管中,加入30 mL提取液和2 mL乙二胺四乙酸二钠溶液(10 g/L),涡旋混匀,置于超声波清洗器中超声提取20 min,全部转移至50 mL容量瓶中,用提取液稀释并定容,混匀,取2mL样液于超滤离心管（货号：AN40I003）中,4500 r/min离心5 min,离心液供液相色谱测定。

3.2 半固体、固体试样

称取0.5 g(精确至0.001 g)试样于50 mL离心管中,加入30 mL提取液和2 mL乙二胺四乙酸二钠溶液(10 g/L),涡旋混匀,置于超声波清洗器中超声提取20 min,全部转移至50 mL容量瓶中,用提取液稀释并定容,混匀,全部转移至50 mL离心管中,12000 r/min离心3 min,取2 mL样液于超滤离心管（货号：AN40I003）中,4500 r/min离心5 min,离心液供液相色谱测定。

注:糖果试样的提取应置于超声波清洗器中50 ℃下超声提取20 min。

3.3 空白试验

除不加试样外,采取完全相同的分析步骤、试剂和用量,进行同批次操作。

4、仪器参考条件

色谱柱:C18柱,柱长150 mm,内径4.6 mm,粒径5 μm,或等效柱 Origsil C18 5 μm, 150 x 4.6 mm（货号：AN80B002） 。

流动相:流动相 A:四丁基溴化铵-磷酸二氢钾混合溶液(pH 7.4),流动相 B:乙腈。梯度洗脱程序见表1。

柱温:35 ℃。

流速:1.0 mL/min。

检测波长:250 nm。

进样量:20 μL。

4、谱图

吡咯并喹啉醌二钠盐标准溶液(5.00 mg/L)液相色谱图

5、加标回收率

由表可知，该方法的加标回收率范围为82.1%～103.3%，RSDs为0.7%～2.5%，该方法适用于食品中吡咯并喹啉醌二钠盐的日常分析检测。